透析是指溶质在浓度梯度的驱使下,选择性扩散通过半透膜,从而达到大/小分子分离,膜两侧浓度平衡,即小颗粒的溶质通过膜,而大分子物质不能通过,被截留在膜另一边。
如果将样品置于透析膜管内,通过置换膜管外部的透析缓冲液,可将小颗粒物质清除,从而达到纯化大分子物质的目的。一般来说,一天之内置换3-5次缓冲液,然后在室温条件下,放在搅拌台上隔夜透析,即可达到高效的透析结果。标准的透析操作一般需要16-24小时。许多因素会影响透析效率,包括:扩散系数、pH值、温度、时间、物质浓度、样品体积、透析缓冲液体积、透析缓冲液的置换次数、膜表面积、膜厚度、分子带电荷及缓冲液搅拌速率。
透析缓冲液的体积越大,小分子扩散的驱动力越大。我们一般推荐缓冲液和样品的体积比为100:1。当扩散速率降低,膜两侧溶液趋于平衡时,通过置换缓冲液,可维持小分子扩散驱动力和透析速率。我们一般推荐在12-24小时内,置换缓冲液2到3次,具体安排如下:
第一次缓冲液置换:透析开始后2-3小时
第二次缓冲液置换:透析开始后4-5小时
最后一次缓冲液置换:透析隔夜之前
关于膜表面积和样品量之间的关系有没有经验法则?
表面积与体积的比值取决于膜管扁平宽度。如果有两段相同长度的膜管,扁平宽度较小的膜管具有较高的比表面积,而扁平宽度较大的膜管比表面积相对较小,也就是说,前者的透析速率更快。原因是扁平宽度较小的膜管,溶质的扩散距离较短,溶质之间通过膜孔的竞争也较小。而扁平宽度大,亦即溶质到达膜表面的距离也较长,溶质之间对膜孔的竞争也较大。一般而言,比表面积越大,透析越快。