多酶恒温快速扩增技术在大动物分子诊断领域的应用

　　多酶恒温快速扩增技术在大动物分子诊断领域的应用

　　如何将传统分子检测方法变的更加简单易懂、操作方便和快速精准。一直是分子检测行业的一大课题。各个厂家和科研院所都在这方面投入了大量的时间和金钱。

　　在荧光检测领域，MIRA技术将60分钟以上的核酸扩增阶段，缩短到20分钟。其开发了“核酸胶体金试纸条检测法”，可*抛弃掉高昂的检测设备，仅需配备简单的温控仪器即可（如金属浴、水浴锅等），甚至42°温水和利用人体温度亦可完成扩增反应，且核酸扩增时间进一步缩短到10分钟不到。其结果的准确率与传统PCR检测方式准确率一致。

　　具体操作方法如下：

　　1.采用我司自主开发的快速核酸扩增试剂提取核酸（核酸提取剂与样本混匀，室温静置5分钟即可取上清作为核酸模板），或者采用市场常见“离心柱法”和“磁珠法”提取核酸作为模板亦可；

　　2.取上述模板2μL加入到复融后的反应液中，通过上述各种加热手段，保证加热温度在37°~42°之间10分钟即可。

　　3.上述反应时间结束后，向反应液中加入少许无菌水稀释，后直接插入试纸条，则马上可通过试纸条上的条带颜色变化，从而判定阴阳性。

　　自主研发用时，引物设计注意事项：

　　核酸试纸条三明治夹心检验法探针设计：在上下游引物中间设计一条长度为46-52nt与目的片段互补序列；5’端修饰一个抗原标记（典型FAM）;5’端和3’端中间位置标记一个dSpacer(THF)；3’端标记一个修饰基团，如胺基、生物素或C3-Spacer，同时要求下游引物5’端标记一个修饰基团。

　　该方法极其适用于现场核酸提取。可应用于传染病初筛、食品安全、宠物疾病检测、活体市场抽检等各种不具备完整分子检测条件下的核酸测试。对操作人员专业水平要求低，检测结果可信度高。