透析只需要使用专用的半透膜即可完成,通常是将半透膜制成袋状,将生物大分子样品溶液置入
透析袋内,将此透析袋浸入水或缓冲液中,样品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋内,而盐和小分子物质不断扩散透析到袋外,直到袋内外两边的浓度达到平衡为止。保留在透析袋内未透析出的样品溶液称为“保留液”,袋(膜)外的溶液称为“渗出液”或“透析液”。
透析的动力是扩散压,扩散压是由横跨膜两边的浓度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚度,正比于欲透析的小分子溶质在膜内外两边的浓度梯度,还正比于膜的面积和温度,通常是4℃透析,升高温度可加快透析速度。
透析袋可用动物膜和玻璃纸等,但用多的还是用纤维素(再生纤维素RC、纤维素酯CE、PVDF等)制成的透析袋,目前常用的各种尺寸的透析管,截留分子量MwCO(即留在透析袋内的生物大分子的最小分子量,缩写为MwCO)大概有100、500、1000、2000、3500、8000、10000、15000、20000、25000、50000、100000、250000、500000、1000000等种类,单位为道尔顿(D)。
透析袋制成管状,其扁平宽度为8-77mm不等。为防止干裂,出厂时都用10%的甘油处理过,并含有极微量的硫化物、重金属和一些具有紫外吸收的杂质,它们对蛋白质和其它生物活性物质有害,用前必须除去。
透析袋的储存条件:
未处理前的透析袋可存放于0-43℃环境下,密封包装好以防干裂;处理好暂时不用的透析袋需要放置到透析袋储存液中,并放于4-37℃。
相关储存要点须知:
1.在适当的储存条件下,保质期一般超过两年。干透析袋应储存在室温或4℃的聚乙烯袋中。未开封的透析袋储存在4℃的环境中。
2.一旦透析袋变湿,应将其浸泡在溶液中,不允许干燥。持续干燥会导致孔隙结构不可逆的损坏。
3.清洗后,用过的透析袋可储存在4℃或30%乙醇的蒸馏水中,以确保透析袋始终浸没在溶液中。如果长时间不使用,可以加入少量的二氧化氮来防止细菌生长。从现在开始使用透析袋时必须戴手套。